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| 研究物种 | 朝日仙人掌(Opuntia fragilis)——末端茎节易脱落,用于无性繁殖;修罗仙人掌(Opuntia polyacantha)——茎节较大,不易脱落 |
| 采集地点 | 加拿大萨斯喀彻温省萨斯卡通市西南约30 km的Pike Lake省立公园附近(51°54′N, 106°50′W,海拔约520 m) |
| 采集时间 | 1985年9月 – 1986年9月,覆盖全年多个关键时间点(9月6日、10月10日、12月10日、4月8日、6月18日、7月30日等) |
| 温度监测 | 在朝日仙人掌微生境(土表上方1 cm处)放置最高-最低温度计,记录温度极值;并参考附近气象站数据(1892–1986年历史极值) |
| 冷冻处理 | 茎节置于湿润砂中,在精密温控冷冻箱内以 -3.5°C 过夜引发结冰,随后以 2°C/h 降温至 -12°C,再以 5°C/h 降至 -70°C。部分茎节预冷至 -20、-30、-40°C 后直接浸入液氮(-196°C)1小时 |
| 解冻与恢复 | 4°C 缓慢解冻过夜,移栽至湿润沙土中,在22°C、18小时光周期(3000 lx)下培养4周,部分培养2–3个月观察生根和新茎节再生 |
| 伤害评估 | 分为两级:(1)组织坏死等级(0=无坏死,4=100%坏死);(2)生根和萌芽能力(再生能力) |
| 耐冻性指标 | LT0 = 所有样品均无损伤的最低温度;LT50 = 50%样品受损伤的温度 |
| 耐热处理 | 茎节包裹铝箔并密封于塑料袋中(防刺破),浸入40–65°C水浴60分钟,恢复培养后按相同标准评估坏死和生根能力,记录HT0和HT50 |
| 含水量测定 | 茎节切片后在70°C烘干7–10天至恒重,以干重百分比和鲜重百分比表示 |